ساخت کتابخانه آنتی بادی شتری دایمر با قابلیت ویژگی و ظرفیت دوگانه برعلیه مارکرهای توموری

در این پژوهش دو کتابخانه آنتی بادی دو ظرفیتی و دو ویژگی vhh-vhh و vhh-vh بر ضد آنتی ژن های توموری رده سلولی skbr3 ساخته شد. این لاین سلولی مارکرهای توموری مربوط به سرطان سینه را بیان می کند، که از جمله آن ها her2 است که بیان بالایی در این لاین سلولی دارد. مارکرهای توموری مولکول هایی هستند که قادرند حضور سرطان را محرز کنند و اطلاعاتی در مورد رفتار بعدی سرطان مثل قابلیت متاستاز و یا پاسخ به درمان فراهم آورند. بعد از کشف آنتی بادی شتری به عنوان آنتی بادیی که عاری از زنجیره سبک است، توجه دانشمندان به سمت این آنتی بادی به عنوان یک وسیله مفید برای تشخیص و درمان بسیاری از بیماری ها جلب شد. مهمترین مزیت دمین متغیر این آنتی-بادی (vhh)، کوچکی و به دنبال آن ایمنی زایی پایین در انسان و قابلیت ردیابی آنتی ژن هایی است که خارج از دسترس دیگر آنتی بادی هاست. مطالعات مختلف نشان داده اند که اشکال دو ظرفیتی و دو ویژگی آنتی بادی تمایل و اختصاصیت بسیار بالاتری برای اتصال به آنتی ژن نسبت به آنتی بادی های تک ظرفیتی دارند. نواحی متغیر زنجیره های سنگین vh و vhh به کمک واکنش pcr، از cdna سنتز شدند. لولای آنتی بادیigg2 و igg3 شتر، به عنوان لینکر برای اتصال vhh به vhh و همچنین اتصال vh به vhh، مورد استفاده قرار گرفتند. دو قطعه آنتی بادی به کمک روش انتقال به وکتور به هم متصل شدند. در ابتدا قطعه vhh-hing به کمک آنزیم برش دهنده sac1 و xho1 به درون وکتور فاژمیدی pcomb3x، انتقال داده شد. در مرحله بعد، قطعات vhh و vh که با کمک آنزیم-های spe1 و xho1 برش داده شدند، به وکتور منتقل شدند. سرانجام وکتور حاوی آنتی بادی دو ظرفیتی و دو ویژگی vhh-hing-vhh و vhh-hing-vh با کمک الکتروپوریشن به درون باکتری الکتروکامپتنت dh5? انتقال داده شد و کتابخانه هایی با بزرگی 105 کلون ساخته شد. همچنین بیان این کتابخانه بررسی شد. به منظور بررسی تنوع کتابخانه های حاضر، بر روی چند نمونه rflp انجام شد. تفاوت در الگوی برش قطعات، نشان دهنده تنوع کتابخانه حاضر است.